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生物樣品透射電鏡簡(jiǎn)易制樣步驟

發(fā)布日期:2012-07-21 瀏覽數(shù):1768

一.取材:

組織塊小于1立方毫米

二.固定:      

2.5%戊二醛,磷酸緩沖液配制固定2小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。

用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次

1%鋨酸固定液固定                2-3小時(shí)

用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次

三.脫水:      

50%乙醇                        15-20分

70%乙醇                        15-20分

90%乙醇                        15-20分

90%乙醇 90%丙酮(1:1)        15-20分

90%丙酮                        15-20分

以上在4度冰箱內(nèi)進(jìn)行

100%丙酮         室溫         15-20分三次

四.包埋:      

純丙酮+包埋液(2:1)室溫 3-4小時(shí)

純丙酮+包埋液(1:2)室溫 過(guò)夜

純包埋液                 37度 2-3小時(shí)

五.固化:      

37度烘箱內(nèi)                 過(guò)夜

45度烘箱內(nèi)                 12小時(shí)

60度烘箱內(nèi)                 24小時(shí)

六.超薄切片機(jī)切片 50-60 nm

七.3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色

八.透射電鏡觀察


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